小鼠瘦素檢測試劑盒是用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成Z終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。
小鼠瘦素檢測試劑盒的操作流程：
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃，包被過夜。
(3)洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。
(6)洗板，同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內，孵育60min。
(9)洗板，同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應。
(12)分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理：在得出標本(S)和陰性對照(N)的OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
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